صفحه اصلی فهرست مقالات مشخصات مقاله
پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی
شماره‌های پیشین نشریه
دوره دوره 20 (1396)
دوره دوره 19 (1395)
دوره دوره 18 (1394)
دوره دوره 17 (1393)
دوره دوره 16 (1392)
دوره دوره 15 (1391)
دوره دوره 14 (1390)
دوره دوره 13 (1389)
دوره دوره 12 (1388)
دوره دوره 11 (1387)
دوره دوره 10 (1386)
دوره دوره 9 (1385)
دوره دوره 8 (1384)
جهاندار, هدی, خلج, وحید, نعمت الهی, لیلا, زندی, فاطمه, عنایتی, سمیه, وزیری, بهروز. (1392). تأثیر بیان پایدار IgG4 نوترکیب بر رشد سلول‏های Sp2.0. پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی, 16(4), 27-37.
هدی جهاندار; وحید خلج; لیلا نعمت الهی; فاطمه زندی; سمیه عنایتی; بهروز وزیری. "تأثیر بیان پایدار IgG4 نوترکیب بر رشد سلول‏های Sp2.0". پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی, 16, 4, 1392, 27-37.
جهاندار, هدی, خلج, وحید, نعمت الهی, لیلا, زندی, فاطمه, عنایتی, سمیه, وزیری, بهروز. (1392). 'تأثیر بیان پایدار IgG4 نوترکیب بر رشد سلول‏های Sp2.0', پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی, 16(4), pp. 27-37.
جهاندار, هدی, خلج, وحید, نعمت الهی, لیلا, زندی, فاطمه, عنایتی, سمیه, وزیری, بهروز. تأثیر بیان پایدار IgG4 نوترکیب بر رشد سلول‏های Sp2.0. پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی, 1392; 16(4): 27-37.

تأثیر بیان پایدار IgG4 نوترکیب بر رشد سلول‏های Sp2.0

مقاله 3، دوره 16، شماره 4، زمستان 1392، صفحه 27-37  XML اصل مقاله (943 K)
نوع مقاله: مقاله پژوهشی
نویسندگان
هدی جهاندار؛ وحید خلج؛ لیلا نعمت الهی؛ فاطمه زندی؛ سمیه عنایتی؛ بهروز وزیری
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
چکیده
هدف: مطالعه تغییرات فیزیولوژیک سلول‏های نوترکیب در مقایسه با سلول‏های والد، اطلاعات مفیدی برای بهبود کارآیی فرایند تولید فراهم می‏نماید. در این مطالعه تأثیر بیان IgG4 کایمریک علیه نشانگر CD33 بر رشد سلول Sp2.0 بررسی شده است.
مواد و روش‏ها: ژن‏های نواحی متغیر زنجیره‏های سبک و سنگین آنتی‏بادی تولید شده توسط سلول M195 به ترتیب در ناقل‏های pFUSE-CLIg-hk و pFUSE-CHIg-hG4 همسانه‏سازی شد. پلاسمیدهای نوترکیب در دو مرحله با استفاده از لیپوفکتامین به سلول‏های Sp2.0 منتقل شد. سلول‏های پایدار در محیط حاوی آنتی‏بیوتیک‏های بلاستیسیدین و زئوسین انتخاب شدند. الحاق سازه نوترکیب به ژنوم سلول‏های تراریخت مقاوم به آنتی‏بیوتیک‏ها و همچنین بیان IgG4 با استفاده از روش‏های PCR، RT-PCR و وسترن بلات بررسی شد. برای مطالعه پارامترهای کینتیکی، سلول‏های والد و نوترکیب با چگالی 105×1 سلول در هر میلی‏لیتر محیط کشت در پلیت 12 خانه به مدت 9 روز انکوبه شدند و هر 24 ساعت از سلول‏ها نمونه‏برداری شد و شمارش تعداد سلول زنده و محاسبه درصد زنده بودن انجام گرفت.
نتایج: بر اساس نتایج PCR، RT-PCR و وسترن بلات، ایجاد سلول تولید کننده پایدار IgG4 تأیید شد. این مطالعه نشان داد که حداکثر چگالی سلولی برای سلول‏های نوترکیب در مقایسه با سلول‏های والد 46 درصد کاهش یافته است در حالی که در این نمونه‏ها درصد سلول‏های زنده تغییری نکرده است.
نتیجه‏گیری: بر اساس نتایج این تحقیق بیان IgG4 کایمریک در سیستم Sp2.0/pFUSE-CHIg-hG4-pFUSE-CLIg-hk باعث تغییر برخی از پارامترهای رشدی سلول میزبان می‏شود.
کلیدواژه ها
آنتی‏بادی تک دودمانی؛ IgG4؛ سلول Sp2.0؛ حداکثر چگالی سلولی
موضوعات
بیوتکنولوژی
عنوان مقاله [English]
The Effects of Recombinant IgG4 Expression on the Growth of Sp2.0 Cell Lines
نویسندگان [English]
Hoda Jahandar؛ Vahid Khalaj؛ Leila Nematollahi؛ Fatemeh Zandi؛ Somayeh Enayati؛ Behrouz Vaziri
Department of Medical Biotechnology, Biotechnology Research Center, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
چکیده [English]
Objective: The study of physiological changes in recombinant cell lines provides useful information to improve production performance. In this study, we investigate the effects of an anti-CD33 chimeric IgG4 expression on Sp2.0 cell growth.
Methods: Variable region genes of light and heavy chains of monoclonal antibody produced by M195 were cloned in pFUSE-CLIg-hk and pFUSE-CHIg-hG4 expression vectors, respectively. Transfection of recombinant plasmids into Sp2.0 cell lines was performed using lipofectamine in two steps. Positive transformant cells were isolated and subjected to PCR, RT-PCR and Western blot analysis to confirm the integration of gene cassettes and the expression of recombinant IgG4.
To assess the growth parameters, recombinant and parent Sp2.0 cell lines were seeded at a density of 1×105 cells/ml in duplicate into 12-well plates. For nine days, culture plates were sampled daily and viable cell count and viability determined.
Results: The results of PCR, RT-PCR and Western blot analyses confirmed the generation of stable producer cell lines. In recombinant cells, the maximum cell density decreased by 46%. However, it was observed that IgG4 expression had no effect on cell viability of these transfectants.
Conclusion: Our results showed that the expression of recombinant IgG4 can change growth parameters in Sp2.0 cell lines that express the pFUSE-CHIg-hG4-pFUSE-CLIg-hk construct.
کلیدواژه ها [English]
Monoclonal antibody, IgG4, Sp2.0 cell line, Maximum cell density
مراجع
[1]     Butler M. Animal cell cultures: recent achievements and perspectives in the production of biopharmaceuticals. Appl Microbiol Biotechnol 2005; 68(3): 283-91.

[2]     Barnes LM, Dickson AJ. Mammalian cell factories for efficient and stable protein expression. Curr Opin Biotechnol 2006; 17(4): 381-6.

[3]     Palomares LA, Estrada-Mondaca S, Ramírez OT. Production of recombinant proteins: challenges and solutions. Methods Mol Biol 2004; 267: 15-52.

[4]     Kaufmann H, Mazur X, Fussenegger M, Bailey JE. Influence of Low Temperature on Productivity, Proteome and Protein Phosphorylation of CHO Cells. Biotechnol Bioeng 1999, 63: 573-82.

[5]     Dinnis DM, James DC. Engineering mammalian cell factories for improved recombinant monoclonal antibody production: lessons from nature? Biotechnol Bioeng 2005; 91(2): 180-9.

[6]     Glick BR. Metabolic load and heterologous gene expression. Biotechnol Adv 1995; 13(2): 247-61.

[7]     Yallop CA, Nørby PL, Jensen R, Reinbach H, Svendsen I. Characterisation of G418-induced metabolic load in recombinant CHO and BHK cells: effect on the activity and expression of central metabolic enzymes. Cytotechnology 2003; 42(2): 87-99.

[8]     Yallop CA, Svendsen I. The effects of G418 on the growth and metabolism of recombinant mammalian cell lines. Cytotechnology 2001; 35(2): 101-14.

[9]     Rita Costa A, Elisa Rodrigues M, Henriques M, Azeredo J, Oliveira R. Guidelines to cell engineering for monoclonal antibody production. Eur J Pharm Biopharm 2010; 74(2): 127-38.

[10]  Birch JR, Racher AJ. Antibody production. Adv Drug Deliv Rev 2006; 58(5-6): 671-85.
[11]  Chu L, Blumentals I, Maheshwari G. Production of recombinant therapeutic proteins by mammalian cells in suspension culture. In: Smales CM, James DC (Editors). Therapeutic Proteins  Methods in Molecular Biology™. Totowa: Humana Press Inc, 2005; p: 107-21.
[12]  Deyev SM, Lieber A, Radko BV, Polanovsky OL. Production of recombinant antibodies in lymphoid and non-lymphoid cells. FEBS Lett 1993; 330(2): 111-3.

[13]  Beck A, Reichert JM. Marketing approval of mogamulizumab: a triumph for glyco-engineering. MAbs 2012; 4(4): 419-25.

[14]  Reichert JM. Antibodies to watch in 2010. MAbs 2010; 2(1): 84-100.

[15]  Suzuki E, Ollis DF. Enhanced antibody production at slowed growth rates: experimental demonstration and a simple structured model. Biotechnol Prog 1990; 6(3): 231-6.

[16]  Bentley WE, Mirjalili N, Andersen DC, Davis RH, Kompala DS. Plasmid-encoded protein: the principal factor in the "metabolic burden" associated with recombinant bacteria. Biotechnol Bioeng 1990; 35(7): 668-81.

[17]  Betenbaugh MJ, Beaty C, Dhurjati P. Effects of plasmid amplification and recombinant gene expression on the growth kinetics of recombinant E. coli. Biotechnol Bioeng 1989; 33(11): 1425-36.

[18]  Kim SJ, Kim NS, Ryu CJ, Hong HJ, Lee GM. Characterization of chimeric antibody producing CHO cells in the course of dihydrofolate reductase-mediated gene amplification and their stability in the absence of selective pressure. Biotechnol Bioeng 1998; 58(1): 73-84.

[19]  Pendse GJ, Karkare S, Bailey JE. Effect of cloned gene dosage on cell growth and hepatitis B surface antigen synthesis and secretion in recombinant CHO cells. Biotechnol Bioeng 1992; 40(1): 119-29.

[20]  Gu MB, Todd P, Kompala DS. Metabolic burden in recombinant CHO cells: effect ofdhfr gene amplification and lacZ expression. Cytotechnology 1995; 18(3): 159-66.

[21]  Zabriskie DW, Arcuri EJ. Factors influencing productivity of fermentations employing recombinant microorganisms. Enzyme Microb Tech 1986, 8(12): 706-17.

آمار
تعداد مشاهده مقاله: 3,478
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,651