داودیان, ناهید, صاحبقدم لطفی, عباس, سلیمانی, مسعود, مولی, سید جواد. (1393). ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو RNAlet-7f منجر به افزایش بیان ژن HNF4a در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی میشود. پژوهشهای آسیبشناسی زیستی, 17(1), 39-49.
ناهید داودیان; عباس صاحبقدم لطفی; مسعود سلیمانی; سید جواد مولی. "ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو RNAlet-7f منجر به افزایش بیان ژن HNF4a در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی میشود". پژوهشهای آسیبشناسی زیستی, 17, 1, 1393, 39-49.
داودیان, ناهید, صاحبقدم لطفی, عباس, سلیمانی, مسعود, مولی, سید جواد. (1393). 'ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو RNAlet-7f منجر به افزایش بیان ژن HNF4a در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی میشود', پژوهشهای آسیبشناسی زیستی, 17(1), pp. 39-49.
داودیان, ناهید, صاحبقدم لطفی, عباس, سلیمانی, مسعود, مولی, سید جواد. ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو RNAlet-7f منجر به افزایش بیان ژن HNF4a در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی میشود. پژوهشهای آسیبشناسی زیستی, 1393; 17(1): 39-49.
ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو RNAlet-7f منجر به افزایش بیان ژن HNF4a در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی میشود
1گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2گروه هماتولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3گروه ژنتیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
چکیده
هدف: میکروRNA ها، RNA های غیر کد کنندهای است که بهعنوان تنظیم کننده چندین فعالیت زیستی مثل متابولیسم، تکثیر و تنظیم سلولی عمل میکند. مطالعات اخیر نشان دهنده پتانسیل بالای این مولکولهای کوچک در تمایز سلولهای بنیادی به سلولهای مشخص است. هدف از مطالعه حاضر ارزیابی اثر let-7f بر بیان ژن عامل هستهای کبد (HNF4a) و عوامل خاص کبدی از جمله آلبومین، آلفا فیتوپروتئین، سیتوکراتین 18 و سیتوکراتین 19 در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی است. مواد و روشها: سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی تحت تأثیر آنزیم کلاژناز نوع I از بافت چربی انسانی استخراج شده و سپس با استفاده از لنتیویروسهای حاوی مهار کننده let-7f و Scramble (کنترل منفی) ترانسداکت شدند. سپس تغییر در سطح بیان ژنهای HNF4a، آلبومین، آلفا فیتوپروتئین، سیتوکراتین 18 و سیتوکراتین 19 در زمانهای متفاوت با استفاده از روش Real-time PCR بررسی شد. نتایج: کارآیی ترانسداکشن ناقلهای لنتی ویروسی در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی بیش از 80 درصد بود که با بررسی بیان پروتئین فلورسانت سبز ارزیابی شد. نتایج Real-time PCR نشان داد که مهار let-7f در سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی منجر به افزایش معنیدار در بیان ژنهای خاص کبدی در مقایسه با کنترل منفی میشود. همچنین بیان ژن HNF4a روز چهاردهم بعد از ترانسداکشن افزایش داشت که تأیید کننده سرکوب ژن HNF4a توسط let-7f است. نتیجهگیری: نتایج این تحقیق نشان داد که let-7f بهعنوان یک تنظیم کننده منفی در بیان ژن HNF4a عمل میکند و مهار let-7f منجر به افزایش بیان نشانگرهای ویژه کبدی میشود. بنابراین مهار let-7f میتواند ابزار مؤثری در به راهاندازی تمایز سلولهای بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی به سمت رده هپاتوسیتی باشد.
The let-7f microRNA Functions as a Negative Regulator of HNF4a Expression in Human Adipose Tissue-derived Stem Cells
نویسندگان [English]
Nahid Davoodian1؛ Abbas Sahebghadam Lotfi1؛ Masoud Soleimani2؛ Seyed Javad Mola3
1Department of Clinical Biochemistry, Faculty of Medical Science, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
2Department of Hematology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
3Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
چکیده [English]
Objective: microRNAs (miRNAs) are noncoding RNAs that function as key regulators of diverse biological activities such as cellular metabolism, cell proliferation and cell cycle regulation. Recent studies have indicated the high potential of these small molecules to control stem cell differentiation into desired cells. The aim of present study is to investigate the possible effect of let-7f on expression of hepatic nuclear factor 4 alpha (HNF4a) and some hepatic specific factors such as albumin (ALB), alpha fetoprotein (AFP), cytokeratin18 (CK18) and cytokeratin19 (CK19) in human adipose tissue derived stem cells (hADSCs). Methods: ADSCs were isolated from human adipose tissue using collagenase type I and were transduced by recombinant lentiviruses that contained human inhibitor let-7f and Scramble (negative control). Afterward, the expressions of HNF4a, ALB, AFP, CK18 and CK19 were evaluated by Real-time PCR at different time points. Results: Transduction efficiency of lentiviral vectors into ADSCs was more than 80% as judged by the expression of the GFP reporter gene. Real-time PCR analysis revealed that inhibition of let-7f in hADSCs resulted in significant up regulation of hepatic specific genes compared with the negative control. The expression level of HNF4a also increased in experimental cells at day 14, which supported the suppression of HNF4a expression by let-7f. Conclusion: The results of this study identified let-7f as a negative regulator of HNF4a expression in hADSCs and increased the expression of hepatocyte specific factors through silencing of let-7f. Therefore, suppression of let-7f could be a considerable tool for hepatic differentiation of hADSCs.
[14] Huntzinger E, Izaurralde E. Gene silencing by microRNAs: contributions of translational repression and mRNA decay. Nat Rev Genet 2011; 12(2): 99-110.
[15] Ambros V. The functions of animal microRNAs. Nature 2004; 431(7006): 350-5.
[26] Kim YJ, Bae SW, Yu SS, Bae YC, Jung JS. miR-196a regulates proliferation and osteogenic differentiation in mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue. J Bone Miner Res 2009; 24(5): 816-25.
[31] Koh W, Sheng CT, Tan B, Lee QY, Kuznetsov V, Kiang LS, Tanavde V. Analysis of deep sequencing microRNA expression profile from human embryonic stem cells derived mesenchymal stem cells reveals possible role of let-7 microRNA family in downstream targeting of hepatic nuclear factor 4 alpha. BMC Genomics 2010; 11 Suppl 1: S6.